Optimierung der ELISA-Assay-Komponenten
Typischerweise wird die Optimierung von ELISA-Assay-Komponenten (Antikörper, Puffer, Proben) durch Testen verschiedener Lösungen durchgeführt, um die ideale Arbeitskonzentration für jede Komponente zu ermitteln. Für den Capture-Antikörper werden Verdünnungen im Coating-Puffer im Bereich von 5 bis 15 µg/ml für ungereinigte Antikörper und 1 bis 12 µg/ml für affinitätsgereinigte Antikörper hergestellt. Affinitätsgereinigte Antikörper werden für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis empfohlen. Die Probe sollte in einer hohen und einer niedrigen Konzentration zugegeben werden, die den erwarteten Arbeitsbereich widerspiegelt. Für den Detektionsantikörper kann ein ähnlicher Verdünnungsaufbau im Standardverdünnungsmittel durchgeführt werden, der von 1 bis 10 µg/ml für ungereinigte Antikörper und 0,5 bis 5 µg/ml für affinitätsgereinigte Antikörper reicht.
Es steht eine große Auswahl an kommerziellen Blockierungspuffern zur Verfügung, von denen einige BSA enthalten. Die Hersteller dieser Puffer bieten in der Regel umfangreiche Optimierungsprotokolle an. Wenn der Blockierungspuffer nicht vorformuliert ist, versuchen Sie verschiedene Konzentrationen des Proteins, wie z.B. BSA.
Einige Arten von Proben können Matrix-Effekte verursachen, z.B. Serum oder Plasma. Diese können durch Verdünnen der Probe reduziert werden. Standardverdünnungsmittel sollten die Matrix der Probe so genau wie möglich wiedergeben und die Linearität der Verdünnungen überprüfen, um einen guten dynamischen Messbereich zu gewährleisten.
Gewährleistung der Well-to-well-Konsistenz
ELISA werden typischerweise mit Multiwellplatten durchgeführt. Wenn Sie sich entscheiden, Ihren ELISA manuell zu pipettieren, stellen Sie sicher, dass alle Ihre Pipetten gut kalibriert sind. Es ist ratsam, während des Pipettierens Ihres Assays visuell zu überprüfen, ob der Füllstand in der Pipettenspitze und in den Wells auf dem gleichen Niveau liegt, um inkonsistente Ergebnisse zu vermeiden.
Wenn Sie nach höherer Durchsatzleistung und schnellerer Leistung suchen, können Mikroplatten-Wascher oder ELISA-Assay-Workstations eine sinnvolle Ergänzung Ihres Workflows sein. Diese Instrumente helfen Ihnen, Ihre Produktivität zu maximieren und die Well-to-well-Konsistenz zu optimieren.