Ratgeber zur Problembehebung beim ELISA
Haben Sie ein Problem mit Ihrem ELISA? Die folgende Tabelle beschreibt einige der häufigsten Probleme, die bei der Durchführung eines ELISA auftreten können, und bietet mögliche Lösungen.
ELISA – Probleme und Lösungen
| Problem | Mögliche Ursache | Lösungsansätze |
|---|---|---|
| Schwaches oder kein Signal | Fehlerhafte Reagenzienlagerung | Überprüfen Sie nochmals, ob Sie die Empfehlungen Ihres Kit-Herstellers befolgt haben. |
| Antikörper, der mehrere Wochen lang bei 4°C gelagert oder wiederholten Frost-/Tauzyklen ausgesetzt war. | Benutzen Sie frische Antikörper-Aliquots. | |
| Abgelaufene Reagenzien | Verwenden Sie keine Reagenzien, die nach dem Verfallsdatum liegen. | |
| Fehlerhafte Verdünnungen hergestellt | Überprüfen Sie, ob Ihre Berechnungen korrekt sind. Verwenden Sie eine höhere Konzentration des Detektionsreagenzes. | |
| Fehlerhaftes Assay-Setup | Wiederholen Sie den Test und stellen Sie sicher, dass die Reagenzien gemäß dem Protokoll hergestellt und in der richtigen Reihenfolge hinzugefügt wurden. | |
| Falsche Einstellungen des Plattenlesers | Vergewissern Sie sich, dass die Einstellungen Ihres ELISA-Readers den empfohlenen Wellenlängen/Filtern entsprechen. | |
| Nicht ausreichend Antikörper verwendet | Erhöhen Sie die Konzentration Ihres primären und/oder sekundären Antikörpers. | |
| Wells, die durch Pipette oder Waschspitzen beschädigt wurden. | Seien Sie vorsichtig beim Dosieren und Aspirieren in und aus Wells, wenn Sie manuell pipettieren. Kalibrieren Sie Ihre automatisierten Plattenwascher neu, so dass die Spitzen bei Bedarf nicht den Boden der Wells berühren. | |
| Hohes Hintergrundsignal | Falsche Inkubationstemperatur | Befolgen Sie die Empfehlungen Ihres Kit-Herstellers oder optimieren Sie die Inkubationstemperatur. |
| Falsche Inkubationszeiten | Befolgen Sie die Empfehlungen Ihres Kit-Herstellers oder optimieren Sie die Inkubationszeit. | |
| Unzureichende Waschung der Wells | Wenn Sie manuell pipettieren, wenden Sie die Platte auf saugfähigem Tuch um und lassen Sie sie vollständig entleeren, um eventuelle Restflüssigkeiten zu entfernen. Auch eine Erhöhung der Anzahl der Waschzyklen kann sinnvoll sein. | |
| Substrat, das Licht ausgesetzt ist | Durchführung der Substratinkubation im Dunkeln | |
| Reaktionen nicht gestoppt | Stellen Sie sicher, dass Sie die Stopplösung wie in Ihrem Protokoll empfohlen verwenden, um Überentwicklungen zu vermeiden. | |
| Inkonsistente Replikate | Unzureichende Waschung | Wenn Sie manuell pipettieren, wenden Sie die Platte auf saugfähigem Tuch um und lassen Sie sie vollständig entleeren, um die restliche Flüssigkeit zu entfernen. Auch eine Erhöhung der Anzahl der Waschzyklen kann sinnvoll sein. |
| Keine Plattenanbindung des Capture-Antikörpers | Bereiten Sie sowohl Beschichtungs- als auch Blockierungsschritte wie im Protokoll empfohlen vor. Achten Sie darauf, dass Sie eine ELISA-Platte verwenden. | |
| Fehlerhafte Plattenversiegelung | Verwenden Sie das Versiegelungsmaterial nicht wieder, um eine Kontamination zu vermeiden. Verwenden Sie während der Inkubation einen Plattenversiegeler. |
Haben Sie Konsistenzprobleme bei Ihren ELISA-Assays?
Menschliche Fehler sind eine wichtige Quelle für Probleme im ELISA und anderen Assays, und die Automatisierung kann helfen, diese zu lösen. Wenn Sie überlegen, Ihren ELISA zu automatisieren, werfen Sie einen Blick auf unsere Workflow-Lösungen.