Die Technik hat eine Nachweisgrenze von 1 pg ATP, was etwa 1000 Bakterienzellen entspricht.

Der Einsatz der biolumineszenten ATP-Detektion zur Hygieneüberwachung bietet folgende Vorteile:

  • Geschwindigkeit (Minuten, viel schneller als Seeding und Koloniezählung)
  • Zweckmäßigkeit
  • Messung der Gesamthygiene

Das Prinzip der ATP-Prüfung zur Hygienekontrolle

Für Hygienetests wird der gesamte ATP-Gehalt der Probe bestimmt. Dazu gehören eukaryontisches und mikrobielles ATP. Es ist Vorsicht geboten, um eine Kontamination der Probe oder des Materials zu vermeiden, da ATP auf vielen Oberflächen zu finden ist.

Ein ATP-freier Tupfer wird bereits angefeuchtet geliefert oder wird vom Anwender mit einem ATP-freien Puffer, Wasser oder Extraktionsmittel befeuchtet. Die Verwendung von Extraktionsmittel kann bei der Probenahme helfen, da es bei der Freisetzung von ATP von der Oberfläche wirkungsvoll ist. Bei tragbaren Luminometern erfolgt die Prüfung des Tupfers in der Regel sofort. Bei einigen Produkten sind die Tupfer jedoch mehrere Stunden lang stabil, so dass der Benutzer auf Wunsch an einer " Arbeitsplattform " zum Gerät zurückkehren kann.

Zur Bestimmung des mikrobiellen ATP-Spiegels wird eine selektive Extraktion verwendet. Zuerst wird nicht-mikrobielles ATP mit einem nicht-ionischen Waschmittel (Triton X-100) extrahiert und dann durch Behandlung mit einem hohen Anteil an Kartoffel-ATPase für 5 Minuten zerstört. Anschließend wird das mikrobielle ATP mit Trichloressigsäure (5%), einem organischen Lösungsmittel (Ethanol, Aceton oder Chloroform), das anschließend verdünnt werden muss, um eine Luciferasehemmung zu vermeiden, oder kationischen Reinigungsmitteln extrahiert. Im letzten Schritt werden Luciferase und Luciferin zugegeben und die Lumineszenz mit einem Luminometer gemessen. Ein sorgfältiges Timing von Mischen und Messen ist erforderlich, um die Hemmung der Luciferase zu ermöglichen (Simpson & Hammond, 1991). Da der ATP-Spiegel in eukaryotischen Zellen um drei Größenordnungen höher ist als in Bakterienzellen, ist es manchmal schwierig, getrenntes eukaryotisches und mikrobielles ATP genau zu bestimmen.

Viele Hersteller bieten alle benötigten Reagenzien und Materialien als gebrauchsfertige Kits an, um das Protokoll einfacher und schneller zu machen. 

Interpretation der Ergebnisse

Im Allgemeinen weisen saubere Oberflächen einen geringen Anteil an Gesamt-ATP auf. Daher zeigt eine Lichtausbeute von mehr als dem 2- bis 3-fachen des Hintergrundwerts einer sauberen Oberfläche an, dass der getestete Bereich mit biologischem Material verunreinigt ist. Die Methode ist jedoch sehr empfindlich und in der Praxis kann ein Schwellenwert vom 10 fachem des Hintergrundwerts akzeptiert werden. Unabhängig davon, welches Produkt verwendet wird, bedarf es jedoch einiger Vorarbeiten, um die relevanten Pass/Fail-Grenzwerte für den Test festzulegen. Dies geschieht in der Regel durch die Erhebung von Referenzdaten nach den üblichen Reinigungsverfahren. Der eingestellte Wert hängt von der Art und dem Zustand der Oberfläche und der verwendeten Reinigungsmethode ab.

Zur Hygieneüberwachung empfohlene Instrumente

Tragbare Luminometer sind in der Regel das Instrument der Wahl für die Hygieneüberwachung, da die Messung am häufigsten vor Ort durchgeführt wird. Billige Hand-Luminometer auf Photodiodenbasis reichen manchmal für eine qualitative Analyse aus (kontaminiert / nicht kontaminiert). PMT-basierte Geräte wie das Junior LB 9509 bieten jedoch eine höhere Empfindlichkeit und Dynamik und sind die beste Option für quantitative Messungen.