Bei begrenzten Probenmengen wird die Proteinquantifizierung üblicherweise durch Messung der Absorption bei 280 nm in einem Mikrovolumen-Spektrophotometer durchgeführt, das die Quantifizierung des Gesamtproteins mit nur 1 µL Probe ermöglicht. Um die Konzentration von Proteinmischungen unter Verwendung der Absorption bei 280 nm zu berechnen, wird häufig die Beziehung 1 O.D. Einheit = 1 mg/ml Protein verwendet. Bei bekannten gereinigten Proteinen, die die Absorption durch den Absorptionskoeffizienten des Proteins teilen, ergeben sich jedoch wesentlich bessere Ergebnisse.
Auch wenn die Mehrheit der biologischen und biochemischen Laboratorien zumindest zu einem bestimmten Zeitpunkt eine dieser Methoden angewandt hat, könnte der Nachweis und die Bestimmung einiger Proteinkonzentrationen, wenn überhaupt möglich, nicht zufriedenstellend sein. Die Fluoreszenzmarkierung von Proteinen und der anschließende Nachweis der Markierung mittels Fluoreszenzmessung hat sich in vielen Assaytypen als die Methode der Wahl erwiesen. In diesem Fall ist in der Regel ein Mikroplatten-Fluoreszenz-Reader das Instrument der Wahl für die Messung.
Application Notes zur Proteinquantifizierung
SingleQuant protein quantification assay with the Colibri Microvolume protein quantification based on Amido Black (SingleQuant Assay) with the Colibri Microvolume Spectrophotometer
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PROTEIN QUANTIFICATION USING THE APOLLO LB 917 ABSORBANCE READER This application note demonstrates the suitability of the Apollo absorbance reader for protein quantification using the Bradford, Lowry and BCA assays.
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