¿QUÉ ES UN ENSAYO DE NEUTRALIZACIÓN CON PSEUDOVIRUS?
Un ensayo de neutralización con pseudovirus (también conocido como ensayo de neutralización con virus pseudotipificado o ensayo de neutralización basado en pseudotipo) es un método de laboratorio utilizado para estudiar el efecto de anticuerpos o fármacos para neutralizar la capacidad de los virus para entrar en las células y así prevenir la infección.
Los pseudotipos o partículas de pseudotipo son "virus" quiméricos que consisten en un núcleo de virus (típicamente un vector lentiviral) rodeado por una envoltura lipídica con las glicoproteínas de superficie de otro virus (el virus de interés). Mediante el uso de un vector que no puede replicarse a sí mismo y, por lo tanto, no es patógeno, los virus pueden estudiarse en un sistema más seguro. En el caso del SARS-CoV-2, el pseudovirus tiene que expresar la glicoproteína S, que media la entrada en las células huésped mediante la unión a la enzima 2 convertidora de angiotensina humana (ACE2). Además de las glicoproteínas de superficie del virus de interés, el virus pseudotipado contiene el gen de una luciferasa, que solo se expresa después de entrar en la célula. Cuantos más pseudovirus entran en las células, más luciferasa se expresa, y mayor es la intensidad de la luz emitida.
El ensayo de neutralización con pseudovirus implica incubar las células y el pseudovirus en presencia de diferentes concentraciones de un anticuerpo o fármaco de interés y medir la emisión de luz usando un luminómetro de placas o un lector multimodo. Si el anticuerpo es eficaz para neutralizar las glicoproteínas de superficie y bloquear la entrada a las células, se medirá una reducción significativa en la emisión de luz. El efecto del anticuerpo se muestra usando una de las concentraciones inhibidoras (IC50, IC80 u otras).
¿POR QUÉ SON IMPORTANTES LOS ENSAYOS DE NEUTRALIZACIÓN CON PSEUDOVIRUS?
Los ensayos de neutralización son herramientas muy valiosas para estudiar las respuestas contra virus de anticuerpos humanos y animales creados por vacunación y otras terapias o por exposición natural. Estos ensayos requieren habitualmente el uso de virus de tipo salvaje, lo que limita su aplicación cuando el objeto de estudio es un virus humano altamente patógeno como el SARS-CoV-2.
Sin embargo, los virus deficientes en replicación usados en ensayos de neutralización de virus pseudotipados pueden ser una alternativa segura. Los pseudovirus tienen una estructura conformacional de las proteínas de superficie que se asemeja mucho a la del virus nativo de interés y tienen la misma capacidad para entrar en las células utilizando los mismos mecanismos y receptores que el virus de interés, pero son mucho más seguros de manejar que el virus del que se originaron.
Las propiedades únicas de los pseudovirus permiten que se manejen de manera segura en laboratorios de nivel de bioseguridad (BSL) 2, que generalmente trabajan con agentes que representan un peligro moderado para la salud humana. Esta es una gran ventaja, ya que los virus altamente patógenos como el SARS-CoV-2 requieren laboratorios BSL-3: mientras que la mayoría de las instituciones de investigación tienen laboratorios BSL-2, los laboratorios BSL-3 son mucho menos comunes.
Y por último, pero no menos importante: como el método se basa en la luminiscencia, tiene una alta sensibilidad y un gran rango dinámico.
¿POR QUÉ USAR INSTRUMENTOS BERTHOLD PARA SUS ENSAYOS DE NEUTRALIZACIÓN CON PSEUDOVIRUS?
Berthold Technologies es su socio confiable y competente cuando desea realizar ensayos de neutralización de virus pseudotipados. Nos enorgullece estar entre los pioneros de la medición de luminiscencia y hemos diseñado y desarrollado más de 20 tipos diferentes de luminómetros (tanto de tubo como de microplaca) en las últimas 4 décadas. Reconocido por su precisión, sensibilidad y confiabilidad, Berthold Technologies sigue siendo el líder del mercado de luminómetros en la actualidad.
El luminómetro de placa Centro se puede utilizar para medir la actividad de la luciferasa. Es un instrumento versátil para ensayos de luminiscencia Glow y Flash que puede equiparse con hasta 3 inyectores de alto rendimiento. También se caracteriza por una alta sensibilidad gracias a una estricta selección de fotomultiplicadores que funcionan en modo de conteo de fotones. Debido a su diseño de reducción del crosstalk, el Centro ofrece resultados muy confiables. Un ejemplo de su rendimiento se muestra en los siguientes artículos.
Bat coronaviruses related to SARS-CoV-2 and infectious for human cells
A human monoclonal antibody blocking SARS-CoV-2 infection
SARS-CoV-2 D614G spike mutation increases entry efficiency with enhanced ACE2-binding affinity
El Tristar 5 es un lector modular de microplacas de alto rendimiento equipado con filtros y monocromadores independientes, seleccionables por el usuario, tanto en el lado de la excitación como en el de la emisión. Incluye tecnología avanzada de inyectores aptos para células vivas y óptica One-4-All para un rendimiento sin concesiones de todos los modos de detección.
En el siguiente artículo, Gaussia se utilizó como gen indicador en lugar de luciérnaga. El Tristar 5 realizó la medición de la expresión de luciferasa de Gaussia.
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