ELISA - Résolution des problèmes

Signal faible ou inexistant

Mauvais stockage des réactifs

Vérifiez si vous avez suivi les recommandations du fabricant de votre kit.

Anticorps stockés à 4°C pendant plusieurs semaines ou soumis à des cycles répétés de gel/dégel

Utilisez un nouveau aliquot d'anticorps.

Réactifs périmés

N'utilisez pas de réactifs dont la date d'expiration est dépassée.

Préparations de dilutions incorrectes

Vérifiez si vos calculs sont corrects. Utilisez une concentration plus élevée de réactif de détection.

Mauvaise configuration du test

Répétez l'essai et assurez-vous que les réactifs ont été préparés conformément au protocole et sont ajoutés dans le bon ordre.

Réglages incorrects du lecteur de plaque

Assurez-vous que les paramètres de votre lecteur de microplaques reflètent les longueurs d'onde/filtres recommandés.

Pas assez d'anticorps utilisés

Augmenter la concentration de votre anticorps primaire et/ou secondaire

Puits endommagés par une pipette ou des pointes de lavage.

Faites attention à la distribution et à l'aspiration dans les puits lorsque vous pipettez manuellement. Recalibrez vos laveurs de plaques automatisés afin que les embouts ne touchent pas le fond des puits si nécessaire.

Bruit de fond élevé

Température d'incubation incorrecte

Suivez les recommandations du fabricant de votre kit ou optimisez la température d'incubation

Temps d'incubation incorrects

Suivez les recommandations de votre fabricant de kits ou optimisez la durée d'incubation

Lavage insuffisant

Si l'on pipette manuellement, retourner la plaque sur le tissu absorbant et la laisser se vider complètement, afin d'éliminer tout liquide résiduel. Il peut également être utile d'augmenter le nombre de cycles de lavage.

Substrat exposé à la lumière

Effectuer l'incubation du substrat dans l'obscurité

Les réactions ne s'arrêtent pas

Veillez à utiliser la solution d'arrêt comme recommandé dans votre protocole pour éviter un surdéveloppement.

Répliques incohérentes

Lavage insuffisant

Si l'on pipette manuellement, retourner la plaque sur le tissu absorbant et la laisser se vider complètement, afin d'éliminer tout liquide résiduel. Il peut également être utile d'augmenter le nombre de cycles de lavage.

Pas de fixation de l'anticorps de capture sur la plaque

Préparez les deux étapes, le coating et la fixation, comme recommandé dans le protocole. Assurez-vous que vous utilisez une plaque ELISA.

Mauvais scellage de la plaque

Ne réutilisez pas le scellant pour éviter la contamination de puits à puits. Utilisez le scellant pour plaques pendant l'incubation.