PRINCIPE DES IMMUNOESSAIS

Le principe de base de ces dosages est la spécificité de la réaction anticorps-antigène. Il existe plusieurs formats d'immunoessais (voir ci-dessous sous "Types d'immunoessais") mais tous impliquent un anticorps spécifique se liant à son antigène, et l'utilisation d'un marqueur pour détecter le complexe antigène-anticorps.

Le marqueur peut être soit lié à l'anticorps primaire qui va se fixer à l'antigène, soit à un anticorps secondaire qui va se lier à l'anticorps primaire, ou enfin à une partie de l'antigène ajoutée à l'échantillon qui va entrer en compétition avec l'antigène à mesurer. Pour séparer la fraction liée de la fraction libre, il est nécessaire d'effectuer au moins un lavage. En fait, comme les immunoessais nécessitent généralement plusieurs étapes de lavage, de distribution et d'incubation, l'utilisation de stations de travail est recommandée afin d'automatiser le processus.

TYPES D'IMMUNOESSAIS

Essais immunologiques par signal

Le classement les immunoessais peut se réaliser par le type de signal mesuré, car cela a un impact sur sa sensibilité et sur l'instrumentation nécessaire pour les mesurer. Les types d'immunoessais les plus courants sont

  • ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) si le signal est fourni par une enzyme produisant un substrat coloré et mesuré en utilisant l'absorbance. Ils sont généralement mesurés à l'aide d'un lecteur ELISA ou dans une station de travail ELISA qui automatise le test complet. D es méthodes de détection plus sensibles sont disponibles car la sensibilité d'ELISA est limitée, même si ce type d'immunoessai est le plus couramment utilisé.
  • FIA (Fluorescent ImmunoAssay) si le signal est fourni par des colorants fluorescents (par exemple FITC) ; dans ce cas, la mesure est effectuée à l'aide d'un fluorimètre à microplaques.
  • CLIA (ChemiLuminescent ImmunoAssay) si le signal est fourni par une enzyme qui catalyse une réaction produisant de la lumière. Ils sont mesurés à l'aide d'un luminomètre à microplaques. La luminescence est l'une des méthodes de détection qui offre la plus grande sensibilité.
  • RIA (RadioImmunoAssay) si le signal est fourni par un rayonnement provenant d'un radio-isotope, tel que le 125I. Comme ce sont souvent des isotopes émetteurs de rayons gamma, ils sont généralement mesurés à l'aide d'un compteur gamma. Le rayonnement est une autre des méthodes de détection qui offre la plus grande sensibilité.
  • Des technologies de détection plus récentes ont également été appliquées aux immunoessais, comme le TRF et la technologie Alpha.

Immunoessais par format

Il existe plusieurs formats d'immunoessais différents, selon les complexes antigène-anticorps qui sont formés et l'endroit où se trouve le signal à quantifier. Comme la terminologie vient du test immunologique le plus courant, ELISA, ils sont souvent appelés par le nom des formats ELISA respectifs :

  • ELISA direct : l'anticorps marqué se lie directement à l'antigène d'intérêt.
  • ELISA indirect : l'anticorps marqué se lie à l'anticorps d'intérêt, qui est lié à un antigène immobilisé.
  • Sandwich ELISA : l'antigène d'intérêt est capturé entre un anticorps immobilisé et l'anticorps marqué.
  • ELISA compétitif : l'antigène de l'échantillon entre en compétition avec un antigène inhibiteur, qui se lie à une quantité limitée d'anticorps marqué.

Vous pouvez trouver plus d'informations sur les formats d'immunoessais dans notre page Formats ELISA.

Applications des immunoessais

Les immunoessais sont largement utilisés dans la recherche, la découverte de médicaments et les diagnostics pour une détection très spécifique et rentable des analytes, notamment, mais pas exclusivement :

  • Marqueurs tumoraux, par exemple AFP, CEA, hCG, PSA...
  • Marqueurs cardiaques, par exemple CK-MB, CRP, Digoxine, Myoglobine...
  • Essais basés sur les cellules, par exemple la cytotoxicité cellulaire ...
  • Allergie, par exemple aux histamines, à l'œuf, au lait, aux allergènes...
  • Déficit de croissance, par exemple hGH
  • Activité enzymatique
  • Dépistage des hormones et des stéroïdes, par exemple T4, fT3, TSH...
  • Dépistage de l'abus de drogues, par exemple amphétamines, cocaïne, LSD...
  • Dépistage immunologique
  • Maladies infectieuses, par exemple chlamydia, CMV, hépatite, rubéole...
  • Vétérinaire, par exemple infection bactérienne, fertilité, médicaments, ESB...
  • Aliments et boissons, par exemple les agents pathogènes, les toxines...
  • Analyse de l'eau, par exemple contamination bactérienne, toxines, métaux lourds...
  • L'agriculture, par exemple les endotoxines, les pesticides...
  • Environnement, par exemple produits chimiques industriels, pesticides, agents de surface...

Measurement of cAMP using AlphaScreen® with the Mithras Mithras LB 940 Multimode Plate Reader Used for AlphaScreen® Signal Detection: Measurement of cAMP Production Induced by a G-protein Coupled Receptor

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PhosphoQuest™ assay with Mithras PhosphoQuest™ cell-based ELISA kinase assay with Mithras LB 940 Multimode Reader

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HitHunter™ cAMP HS+ assay with Mithras HitHunter™ cAMP HS+ assay with Mithras LB 940 Multimode Microplate Reader

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cAMP/IP-One HTplex HTRF® assay with Mithras cAMP/IP-One HTplex cell-based experiment performed on Mithras LB 940 Multimode Microplate Reader using HTRF® technology

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Analytical sensitivity using PrioCHECK® Toxoplasma Ab porcine ELISA with the Crocodile Analytical sensitivity of samples tested with the Crocodile ELISA miniWorkstation in comparison to hand processing using PrioCHECK® Toxoplasma Ab porcine ELISA from Prionics AG

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Enzo APP ΔC31 ELISA with the Crocodile Automation of the Enzo APP ΔC31 ELISA kit using the Crocodile ELISA miniWorkstation

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Sedium R&D BSA ELISA kit with the Crocodile Diagnostic Sensitivity and Specificity of samples tested with the Crocodile ELISA miniWorkstation and Bovine Serum Albumin ELISA Kit from Sedium R&D

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Demeditec Cortisol free in Saliva ELISA kit with the Crocodile Automation of the Demeditec Cortisol free in Saliva ELISA kit using the Crocodile ELISA miniWorkstation

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IDEXX Milk Pregnancy Test with the Crocodile Automation of the IDEXX Milk Pregnancy Test using the Crocodile ELISA miniWorkstation

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Bioo Maxsignal® Aflatoxin M1 ELISA Test Kit with the Crocodile Automation of the Bioo Maxsignal® Aflatoxin M1 ELISA Test Kit using the Crocodile miniWorkstation

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Sension Progesterone Milk ELISA using the Crocodile miniWorkstation Precision, Repeatability, Recovery and Linearity of the Sension Progesterone Milk ELISA using the Crocodile ELISA miniWorkstation

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Invitron Intact Proinsulin ELISA using the Crocodile Automation of the Invitron Intact Proinsulin ELISA using the Crocodile miniWorkstation

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Serotonin ELISA from DLD Diagnostika using the Crocodile Automation of the DLD Diagnostika Serotonin ELISA using the Crocodile miniWorkstation

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Diagnostic Sensitivity and Specificity of PrioCHECK® Toxoplasma Ab porcine ELISA using Crocodile Diagnostic Sensitivity and Specificity of samples tested with the Crocodile miniWorkstation and PrioCHECK® Toxoplasma Ab porcine ELISA from Prionics AG

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Repeatability and Reproducibility of PrioCHECK® Toxoplasma Ab porcine ELISA using the Crocodile Repeatability and Reproducibility of tests run on the Crocodile miniWorkstation using PrioCHECK® Toxoplasma Ab porcine ELISA from Prionics AG

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Instruments recommandés pour les immunoessais