Les RLU sont des unités utilisées pour la plupart des mesures de luminescencemais n'ont aucune signification physique et ne sont souvent pas comparables entre les différents instruments. Cela est dû à la manière dont la lumière est mesurée dans un luminomètre : les luminomètres utilisent un tube photomultiplicateur (PMT) ; les photons frappant une photocathode à la fenêtre d'entrée d'un PMT produisent des électrons, qui sont ensuite accélérés par un champ de haute tension et leur nombre multiplié dans une chaîne de dynodes par le processus d'émission secondaire jusqu'à ce qu'ils atteignent finalement l'anode connectée à un circuit de traitement de sortie, après quoi ils sont convertis en un signal de sortie qui est une impulsion (lorsque le PMT est en mode de comptage de photons en fonctionnement) ou un courant analogique lorsque le PMT fonctionne en mode analogique (également appelé mode courant).
La sortie est influencée par le mode PMT, la tension appliquée, l'efficacité du PMT et d'autres paramètres, qui rendent vraiment difficile la mise en relation de la sortie avec une quelconque grandeur physique dépendant de la quantité de lumière émise par l'échantillon. En conséquence, certains instruments peuvent donner des valeurs entre 0 et 10 millions, d'autres entre 0,0001 et 100, d'autres encore quelque chose de complètement différent. Les unités de lumière sont donc conservées par rapport à d'autres mesures prises dans le même instrument.
Si l'utilisation d'unités relatives peut poser problème dans certains domaines, elle est tout à fait acceptable dans la plupart des applications des sciences de la vie, car elles sont principalement liées à un contrôle et elles traitent tous les résultats en fonction de cette valeur (par exemple, les valeurs de la condition B peuvent représenter 50 % de la valeur du contrôle, tandis que les valeurs de la condition C sont 12 fois plus élevées que celles du contrôle).
Il est possible de mesurer un échantillon d'intensité connue dans deux appareils différents et d'utiliser cette valeur comme référence pour comparer les mesures dans les deux appareils. C'est facile et assez fiable lorsque les instruments sont similaires (par exemple, le même fabricant et le même type de PMT), mais il faut être prudent lorsque de la comparaison d'instruments très différents (par exemple, si le PMT fonctionne dans des modes différents, avec des gammes dynamiques différentes, etc.) Il n'est pas recommandé d'utiliser des échantillons biologiques ou chimiques comme référence car il y a un degré élevé de variabilité et parfois il n'est pas possible d'obtenir la même mesure à partir du même échantillon (par exemple, dans les réactions flash, l'échantillon ne peut être mesuré qu'une seule fois et dans les réactions lumineuses, la luminescence peut diminuer considérablement entre la première et la deuxième mesure).
Il est recommandé d'utiliser plutôt des sources lumineuses électroniques (par exemple des LED), qui sont calibrées régulièrement. Voici quelques exemples de ces sources: les plaques test et tubes test luminescents, qui sont souvent utilisés pour vérifier les performances des luminomètres à microplaque ou à tube.
Nos luminomètres à tube et nos lecteurs de microplaques fournissent des valeurs RLU très similaires et comparables. C'est parce que nous utilisons des PMT qui fonctionnent en mode de comptage de photons et mettent en œuvre un facteur RLU interne pour calibrer nos instruments sur des sources de lumière stables d'intensité connue.
RLU ou RLU/s?
De nombreux instruments expriment les valeurs mesurées en tant que RLU, tandis que d'autres considèrent le temps de mesure et utilisent plutôt les RLU/s. Chez Berthold Technologies, nous utilisons les RLU/s comme norme, car cela rend les valeurs comparables quel que soit le temps de mesure. En outre, il est très facile de convertir les RLU/s en RLU : Il suffit de multiplier par le temps de mesure.