ELISA direct

L'ELISA direct est généralement utilisé pour analyser une réponse immunitaire à un antigène, par exemple pour la coloration immunohistochimique de cellules ou de tissus. Cette méthode ELISA nécessite un antigène déposé sur une plaque à puits multiples. Pour la détection, on utilise un anticorps directement conjugué à une enzyme. Le déroulement de cette méthode est relativement simple et ne nécessite que quelques étapes.

Avantages et inconvénients de la méthode ELISA directe

Avantages de l'ELISA direct

  • Simple et rapide - un seul anticorps nécessaire et un procédé en quelques étapes seulement
  • Moins de possibilités d'erreurs - nombre relativement faible d'étapes de pipetage par rapport aux autres méthodes ELISA et, en raison de la nécessité d'un seul anticorps, pas de risque de réactivité croisée des anticorps

Inconvénients de l'ELISA direct

  • Sensibilité limitée - pas d'étape d'amplification du signal
  • La mise au point du test prend du temps - chaque cible de test nécessite un anticorps primaire conjugué spécifique, ce qui rend le test relativement coûteux
  • Risque de réactivité limitée de l'anticorps - la fixation de l'enzyme à l'anticorps peut limiter la disponibilité spatiale des sites sur l'anticorps qui devraient se fixer à l'antigène

ELISA indirect

L'ELISA indirect - la méthode ELISA la plus populaire - utilise un procédé de détection en deux étapes. Tout d'abord, un anticorps primaire non marqué se lie spécifiquement à l'antigène. Ensuite, un anticorps secondaire conjugué à une enzyme se lie spécifiquement à l'anticorps primaire. Cette méthode est généralement utilisée pour déterminer la concentration totale d'anticorps dans les échantillons.

Avantages et inconvénients de la méthode ELISA indirecte

Avantages de l'ELISA indirect

  • Flexibilité - l'anticorps secondaire peut être utilisé à condition qu'il corresponde à l'espèce hôte de l'anticorps primaire et qu'une grande variété d'anticorps secondaires marqués soit disponible dans le commerce
  • Sensibilité - plus d'un anticorps marqué peut se lier à l'anticorps primaire car chaque anticorps primaire contient plusieurs épitopes
  • Immunoréactivité maximale - aucun marqueur n'interfère avec les sites de l'anticorps primaire
  • Économique - moins d'anticorps marqués sont nécessaires

Inconvénients de l'ELISA indirect

  • Flux de travail plus complexe - une étape d'incubation supplémentaire est nécessaire pour l'anticorps secondaire
  • Potentiel de réactivité croisée - signal non spécifique dû à une réactivité croisée avec l'anticorps secondaire

ELISA sandwich

Dans le test ELISA en sandwich, un anticorps dit de capture est utilisé pour enrober les puits, qui se lie ensuite à l'antigène de l'échantillon. L'antigène est ensuite détecté en configuration ELISA directe ou indirecte. Cette méthode est souvent utilisée pour analyser des échantillons complexes.

Avantages et inconvénients de la méthode ELISA en sandwich

Avantages de l'ELISA en sandwich

  • Flexibilité et sensibilité - des méthodes de détection directes et indirectes peuvent être utilisées
  • Haute spécificité - deux anticorps sont utilisés pour détecter l'antigène
  • Convient aux échantillons complexes - la purification de l'antigène avant la mesure n'est pas nécessaire

Inconvénients de l'ELISA en sandwich

  • Flux de travail complexe - nécessite plus d'étapes d'incubation que les autres types d'ELISA
  • Nécessite davantage d'optimisation - la réactivité croisée entre les différents anticorps utilisés doit être vérifiée

ELISA compétitif

Chacun des types de tests ci-dessus peut être adapté pour l'ELISA compétitif, également connu sous le nom d'ELISA d'inhibition. Le concept de base de cette méthode est que l'antigène de l'échantillon est en compétition avec un antigène inhibiteur, se liant à une quantité limitée d'anticorps marqué. L'antigène inhibiteur est pré-enrobé sur une microplaque. Ensuite, l'échantillon préincubé avec l'anticorps marqué est ajouté aux puits. Le signal détecté sera d'autant plus faible que l'échantillon contenait plus d'antigène que la quantité d'anticorps capable de se lier à l'antigène dans les puits est faible. Cette méthode est généralement utilisée pour analyser de petits antigènes qui n'ont qu'un seul épitope.

Avantages et inconvénients de la méthode ELISA compétitive

Avantages de l'ELISA par compétition

  • La plus grande flexibilité - peut être basée sur le format ELISA direct, indirect ou sandwich
  • Spécificité maximale - l'antigène est spécifiquement capturé et détecté
  • Très robuste - minimise les effets de la dilution de l'échantillon et les effets de la matrice de l'échantillon

Inconvénients de l'ELISA par compétition

  • Plutôt long - protocole très complexe
  • Les inconvénients du type de test de détection choisi s'appliquent