La technique a une limite de détection de 1 pg d'ATP, ce qui équivaut à environ 1000 cellules bactériennes.
L'utilisation de la détection bioluminescente de l'ATP pour le contrôle de l'hygiène offre :
- La rapidité (beaucoup plus rapide que l'ensemencement et le comptage des colonies)
- Commodité
- Mesure de l'hygiène totale
PRINCIPE DU TEST ATP POUR LA SURVEILLANCE DE L'HYGIÈNE
Pour les tests d'hygiène, on détermine la teneur totale en ATP de l'échantillon. Cela inclut l'ATP eucaryote et microbienne.L'ATP, étant présent sur de nombreuses surfaces, il est important de ne pas contaminer l'échantillon ou le matériel.
Un écouvillon sans ATP est fourni pré-humidifié ou est humidifié par l'utilisateur avec un tampon sans ATP, de l'eau ou un agent d'extraction. Ce dernier peut aider à l'échantillonnage en raison de son efficacité pour libérer l'ATP de la surface. Grâce aux luminomètres portables, l'écouvillon peut être testé immédiatement. Néanmoins, les écouvillons peuvent être stabilisés un certain nombre d'heures, permettant à l'utilisateur de les traiter ultérieurement sur un poste fixe.
Pour déterminer le niveau d'ATP microbien, on a recours à l'extraction sélective. Tout d'abord, l'ATP non microbienne est extraite avec un détergent non ionique (Triton X-100), puis détruite par un traitement avec un niveau élevé d'ATPase de pomme de terre pendant 5 minutes. Ensuite, l'ATP microbienne est extraite à l'aide d'acide trichloracétique (5 %), d'un solvant organique (éthanol, acétone ou chloroforme) qui devra être dilué ultérieurement pour éviter l'inhibition de la luciférase, ou de détergents cationiques. Dans la dernière étape, la luciférase et la luciférine sont ajoutées et la luminescence est mesurée à l'aide d'un luminomètre. Le mélange et la lecture doivent être effectués avec soin pour permettre l'inhibition de la luciférase (Simpson & Hammond, 1991). Comme le niveau d'ATP dans les cellules eucaryotes est trois ordres de grandeur plus élevé que dans les cellules bactériennes, il est parfois difficile de quantifier séparément l'ATP eucaryote et l'ATP microbienne avec précision.
De nombreux fabricants proposent tous les réactifs et matériels nécessaires sous forme de kits prêts à l'emploi afin de rendre le protocole plus facile et plus rapide.
L'INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
En général, les surfaces propres présentent de faibles niveaux d'ATP total. Par conséquent, un rendement lumineux supérieur à 2 à 3 fois le niveau de la surface propre indique que la zone testée est contaminée par du matériel biologique. Toutefois, la méthode est très sensible et, dans la pratique, un seuil de 10 fois le rayonnement de fond peut être accepté. Néanmoins, quel que soit le produit utilisé, des travaux préliminaires sont nécessaires pour établir les limites de réussite/échec pertinentes pour le test. Cela se fait généralement par la collecte de données de référence selon les procédures de nettoyage normales. Le niveau fixé dépendra du type et de l'état de la surface et de la méthode de nettoyage utilisée.
INSTRUMENTS RECOMMANDÉS POUR LE CONTRÔLE DE L'HYGIÈNE
Les luminomètres portables sont généralement l'instrument de choix pour la surveillance de l'hygiène car on peut effectuer la mesure sur place. Les luminomètres portables bon marché basés sur des photodiodes sont parfois suffisants pour une analyse qualitative (contaminé/non contaminé). Cependant, les instruments basés sur la PMT, tels que le Junior LB 9509, offrent une sensibilité et une gamme dynamique plus élevées et constituent la meilleure option pour les mesures quantitatives.