Le FRET résolue dans le temps combine des méthodologies résolues dans le temps avec le FRET classique pour créer des dosages de grande robustesse et sensibilité :

  • Le FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) est basé sur le fait qu'un colorant donneur (par exemple la CFP) dans un état excité peut transférer une partie de son énergie à une molécule accepteur comme la YFP. L'émission de l'accepteur peut être détectée dès que les deux colorants sont à proximité , par exemple en cas d'interaction entre deux protéines. La performance des essais FRET traditionnels est souvent entravée par la fluorescence de fond des composants de l'échantillon, mais ce type de fluorescence de fond est extrêmement transitoire (avec une durée de vie de l'ordre de la nanoseconde) et peut donc être éliminé à l'aide de méthodes de résolution temporelle.
  • La fluorescence résolue dans le temps (TRF) utilise des fluorophores ayant une très longue durée de vie de fluorescence pour éviter les interférences causées par des molécules à courte durée de vie de fluorescence ou d'autres facteurs (en particulier la lumière d'excitation). Les fluorophores de choix sont généralement des chélates de lanthanides (principalement l'europium, le terbium et le samarium).

Une variante puissante de TR-FRET est le HTRF®

    Applications TR-FRET

    Comme alternative au FRET, le TR-FRET est souvent utilisé pour étudier les interactions protéine-protéine. Cependant, de nombreux autres tests ont également été développés pour mesurer la liaison entre deux macromolécules.

     

    Transcreener® GDP TR-FRET Red Assay with Mithras² Validation of the Mithras² Multimode Microplate Reader with the Transcreener® GDP TR-FRET Red assay

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    Transcreener® GDP TR-FRET Red Assay with TriStar² S Validation of the TriStar² S Multimode Microplate Reader with the Transcreener® GDP TR-FRET Red assay

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    cAMP/IP-One HTplex HTRF® assay with Mithras cAMP/IP-One HTplex cell-based experiment performed on Mithras LB 940 Multimode Microplate Reader using HTRF® technology

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    LECTEURS DE MICROPLAQUES RECOMMANDÉS POUR LE TR-FRET

    Un lecteur de microplaques capable de mesurer la fluorescence avec une grande sensibilité en utilisant des filtres et équipé d'une lampe flash est la meilleure combinaison pour la TRF (un instrument basé sur un monochromateur peut également être utilisé, mais avec des performances moindres).  Pour certaines applications, un détecteur avec une plage spectrale étendue (supérieure à 650 nm) peut être nécessaire. Par exemple, certains tests TR-FRET populaires mesurent le label Europium à 665 nm. Tous les lecteurs de microplaques ci-dessous sont recommandés pour le TR-FRET.

    HTRF® est une marque déposée de Cisbio Bioassays.