QU'EST-CE QU'UN TEST DE NEUTRALISATION DES PSEUDO-VIRUS ?

L'essai de neutralisation des pseudovirus (également appelé essai de neutralisation des virus pseudotypés ou essai de neutralisation basé sur les pseudotypes) est une méthode de laboratoire utilisée pour étudier l'effet des anticorps ou des médicaments pour neutraliser la capacité des virus à pénétrer dans les cellules et ainsi prévenir l'infection.

Les pseudotypes ou particules de pseudotype sont des "virus" chimériques composés d'un noyau viral (généralement un vecteur lentiviral) entouré d'une enveloppe lipidique avec les glycoprotéines de surface d'un autre virus (le virus d'intérêt). En utilisant un vecteur qui ne peut pas se répliquer et qui n'est donc pas pathogène, les virus peuvent être étudiés dans un système plus sûr. Dans le cas du SRAS-CoV-2, le pseudovirus doit exprimer la glycoprotéine S, qui sert de médiateur pour l'entrée dans les cellules hôtes en se liant à l'enzyme humaine de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2). En plus des glycoprotéines de surface du virus en question, le pseudovirus contient le gène d'une luciférase, qui n'est exprimée qu'après avoir pénétré dans la cellule. Plus les pseudovirus pénètrent dans les cellules, plus la luciférase est exprimée et plus l'intensité de la lumière émise est élevée.

Le test de neutralisation des pseudovirus consiste à incuber les cellules et le pseudovirus en présence de différentes concentrations d'un anticorps d'intérêt et à mesurer l'émission de lumière à l'aide d'un luminomètre à plaque ou d'un lecteur multimode. Si l'anticorps est efficace pour neutraliser les glycoprotéines de surface et bloquer l'entrée dans les cellules, une réduction significative de l'émission de lumière sera mesurée. L'effet de l'anticorps est affiché en utilisant une des concentrations inhibitrices (IC50, IC80, ou autres).

POURQUOI LES TESTS DE NEUTRALISATION DES PSEUDO-VIRUS SONT-ILS IMPORTANTS ?

Les tests de neutralisation sont des outils très précieux pour étudier les réponses des anticorps humains et animaux contre les virus provoqués par la vaccination et d'autres thérapies ou par l'exposition naturelle. Ces tests nécessitent couramment l'utilisation de virus de type sauvage, ce qui limite leur application lorsque le sujet de l'étude est un virus humain hautement pathogène tel que le CoV-2 du SRAS.

Toutefois, les virus à déficit de réplication utilisés dans les tests de neutralisation des virus pseudotypés peuvent constituer une alternative sûre. Les pseudovirus ont une structure conformationnelle des protéines de surface qui ressemble étroitement à celle du virus natif d'intérêt et ont la même capacité à pénétrer dans les cellules en utilisant les mêmes mécanismes et récepteurs que le virus d'intérêt, mais ils sont beaucoup plus sûrs à manipuler que le virus dont ils sont issus.

Les propriétés uniques des pseudovirus permettent de les manipuler en toute sécurité dans des laboratoires de niveau de biosécurité 2 (BSL), qui travaillent généralement avec des agents qui présentent un risque modéré pour la santé humaine. C'est un grand avantage, car les virus hautement pathogènes tels que le CoV-2 du SRAS nécessitent des laboratoires de niveau de sécurité biologique 3 : alors que la plupart des établissements de recherche disposent de laboratoires de niveau de sécurité biologique 2, les laboratoires de niveau de sécurité biologique 3 sont beaucoup moins courants.

Et enfin, comme la méthode est basée sur la luminescence, elle présente une grande sensibilité et une large gamme dynamique.

POURQUOI UTILISER DES INSTRUMENTS DE BERTHOLD POUR VOS TESTS DE NEUTRALISATION DES PSEUDO-VIRUS ?

Berthold Technologies est votre partenaire fiable et compétent lorsque vous souhaitez effectuer des tests de neutralisation de virus pseudotypés. Nous sommes fiers de compter parmi les pionniers de la mesure de la luminescence et avons conçu et développé plus de 20 types différents de luminomètres (du tube à la microplaque) au cours des quatre dernières décennies. Réputé pour sa précision, sa sensibilité et sa fiabilité, Berthold Technologies est encore aujourd'hui le leader du marché des luminomètres.

Le luminomètre à microplaques Centro peut être utilisé pour mesurer l'activité de la luciférase. C'est un instrument polyvalent pour les tests de luminescence Glow et Flash qui peut être équipé de 3 injecteurs haute performance. Il se caractérise également par une grande sensibilité grâce à une sélection rigoureuse de photomultiplicateurs fonctionnant en mode de comptage de photons. Grâce à sa conception de réduction de la diaphonie, le Centro fournit des résultats très fiables. Un exemple de ses performances est présenté dans les articles suivants.

A human monoclonal antibody blocking SARS-CoV-2 infection

Naturally mutated spike proteins of SARS-CoV-2 variants show differential levels of cell entry 

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Le Tristar 5 est un lecteur de microplaques modulaire à hautes performances, équipé de filtres et de monochromateurs indépendants, sélectionnables par l'utilisateur, tant du côté de l'excitation que de l'émission. Il comprend une technologie d'injection avancée, respectueuse des cellules, et une optique One-4-All pour une performance sans compromis de tous les modes de détection.

Dans l'article ci-dessous, la Gaussia a été utilisée comme gène rapporteur au lieu de la luciole. Le Tristar 5 a effectué la mesure de l'expression de la luciférase de Gaussia.

Potential host range of multiple SARS-like coronaviruses and an improved ACE2-Fc variant that is potent against both SARS-CoV-2 and SARS-CoV-1

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Des autres publications

Dans les articles suivants, les mesures ont été effectuées avec des versions antérieures de la famille de systèmes Tristar mais peuvent être transférées 1:1 aux nouveaux systèmes Tristar.

Auteur et annéeTitreInstrument
Prévost et al. (2020)

Cross-sectional evaluation of humoral responses against SARS-CoV-2 Spike

TriStar LB 941 Multimode Microplate Reader
Beaudoin-Bussières et al. (2020)Decline of humoral responses against SARS-CoV-2 Spike in convalescent individualsTriStar LB 941 Multimode Microplate Reader