RLU sono le unità utilizzate per la maggior parte delle misure di luminescenza. Le RLU non hanno alcun significato fisico e spesso non sono confrontabili tra strumenti diversi. Ciò è dovuto al modo in cui la luce viene misurata in un luminometro: in breve, i luminometri utilizzano un tubo fotomoltiplicatore (PMT); i fotoni che colpiscono un fotocatodo alla finestra di ingresso di un PMT producono elettroni, che vengono quindi accelerati da un campo ad alta tensione e moltiplicati di numero all'interno di una catena di dinodi dal processo di emissione secondaria, per raggiungere infine l'anodo collegato a un'elaborazione in uscita circuito. Quindi, questo viene tradotto in un segnale di uscita, che può essere un impulso (se il PMT funziona in modalità di conteggio dei fotoni) o una corrente analogica se il PMT funziona in modalità analogica (noto anche come Current Mode).
L'uscita è influenzata dalla modalità PMT, dalla tensione applicata, dall'efficienza del PMT e da altri parametri, che rendono davvero difficile correlare l'uscita a qualsiasi grandezza fisica a seconda della quantità di luce emessa dal campione. Di conseguenza, alcuni strumenti possono dare valori compresi tra 0 e 10 milioni, altri tra 0,0001 e 100, altri qualcosa di completamente diverso. Quindi, le unità di luce vengono mantenute rispetto ad altre misure effettuate nello stesso strumento.
Sebbene l'uso di unità relative possa essere un problema in alcune aree, è assolutamente soddisfacente nella maggior parte delle applicazioni delle life science, poiché sono per lo più correlate ad un controllo e trattano tutti i risultati in relazione a quel valore (ad esempio i valori nella condizione B possono essere il 50% del valore di controllo, mentre i valori nella condizione C sono 12 volte superiori a quelli del controllo).
È possibile misurare un campione di un'intensità nota in due diversi strumenti e utilizzare il valore come riferimento per confrontare le misure in entrambi gli strumenti. Questo è facile e abbastanza affidabile se gli strumenti sono simili (ad esempio, stesso produttore e stesso tipo di PMT), ma è necessario prestare attenzione nel confrontare strumenti che sono molto diversi (ad esempio, con PMT che lavorano in modalità diverse, con dinamiche diverse intervalli e così via). Si sconsiglia di utilizzare campioni biologici o chimici come riferimento, poiché esiste un grado importante di variabilità e talvolta non è possibile ottenere la stessa misura dallo stesso campione (ad esempio, nelle reazioni flash il campione potrebbe essere misurato solo una volta, e nelle reazioni di glow potrebbe esserci un notevole decadimento della luminescenza tra la prima e la seconda misura).
Sono invece consigliate sorgenti luminose elettroniche (ad esempio LED) periodicamente calibrate. Esempi di tali sorgenti sono le nostre piastre per test di luminescenza e tubi per test di luminescenza, e vengono spesso utilizzate per verificare le prestazioni dei luminometri per micropiastre e dei luminometri per tubi, rispettivamente.
I nostri luminometri a tubo e lettori di micropiastre forniscono valori RLU molto simili e confrontabili tra loro. Utilizziamo PMT che funzionano in modalità di conteggio dei fotoni e implementiamo un fattore RLU interno per calibrare i nostri strumenti su sorgenti luminose stabili di intensità nota.
RLU O RLU / S?
Molti strumenti esprimono i valori misurati come RLU, mentre altri tengono conto del tempo di misura e utilizzano invece RLU/s. In Berthold Technologies utilizziamo RLU/s per impostazione predefinita, poiché ciò rende i valori confrontabili indipendentemente dal tempo di misura. Inoltre, è davvero facile convertire RLU/s a RLU: basta moltiplicare per il tempo di misura.