ELISA - suggerimenti per l'ottimizzazione

L'ottimizzazione dei componenti del test ELISA (anticorpi, buffers, campioni) viene eseguita testando diverse soluzioni per identificare la concentrazione di lavoro ideale per ciascun componente. Per l'anticorpo di cattura, vengono preparate diluizioni nel buffer di rivestimento comprese tra 5 e 15 µg / ml per gli anticorpi non purificati e tra 1 e 12 µg / ml per gli anticorpi purificati per affinità. Gli anticorpi purificati per affinità sono consigliati per un rapporto segnale-disturbo ottimale. Il campione deve essere aggiunto in una concentrazione alta e bassa, riflettendo l'intervallo di lavoro previsto. Per l'anticorpo di rilevamento, è possibile eseguire una configurazione di diluizione simile in diluente standard, che va da 1 a 10 µg / ml per gli anticorpi non purificati e da 0,5 a 5 µg / ml per gli anticorpi purificati per affinità.

È disponibile un'ampia gamma di buffer di blocco commerciali tra cui scegliere, alcuni dei quali contengono BSA. I produttori di questi buffer di solito forniscono ampi protocolli di ottimizzazione. Se il buffer bloccante non è preformulato, prova a concentrazioni diverse della proteina, come BSA.

Alcuni tipi di campioni possono causare effetti matrice, ad esempio siero o plasma. Questi possono essere ridotti diluendo il campione. I diluenti standard devono riflettere il più fedelmente possibile la matrice del campione e la linearità delle diluizioni deve essere controllata per garantire un buon intervallo dinamico.