Strumenti per la misura della fluorescenza e della luminescenza in vivo per lo studio delle interazioni proteina-proteina.

I lettori di micropiastre sono un ampio gruppo di strumenti che includono lettori a tecnologia singola e lettori multimodali. Il vantaggio principale dei lettori di micropiastre rispetto ad altri strumenti disponibili per la misura delle tecniche PPI è che possono misurare molti campioni in un tempo relativamente breve: tutti i lettori possono misurare micropiastre da 96 pozzetti e alcuni possono anche misurare micropiastre da 384 pozzetti e 1536 pozzetti. Inoltre, hanno un'eccellente sensibilità per entrambe le misure di fluorescenza e luminescenza grazie all'adozione di tubi fotomoltiplicatori in grado di rilevare anche le più piccole quantità di fotoni. Tuttavia, rispetto agli strumenti di imaging come i microscopi confocali e i sistemi di imaging in vivo, i lettori di micropiastre non forniscono praticamente alcuna informazione spaziale che consentirebbe la localizzazione dell'interazione.

Sia FRET che Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) possono essere misurate utilizzando qualsiasi lettore di micropiastre a fluorescenza con filtri adeguati. Tuttavia, poiché la gamma spettrale delle possibili coppie FRET è molto ampia, è consigliabile testare qualsiasi fluoroforo che emette a lunghezze d'onda maggiori di 600 nm contro la gamma spettrale dello strumento, poiché in alcuni lettori un'estensione della gamma spettrale a 850 o 900 nm è opzionale. Come nel caso di BRET, le prestazioni di FRET quando si usano i filtri sono generalmente migliori rispetto ai monocromatici.

Sebbene sia comune per i moderni lettori di micropiastre essere in grado di misurare TR-FRET, a volte è una caratteristica opzionale che potrebbe mancare negli strumenti di fascia bassa o più vecchi. Tuttavia, il termine TR-FRET è poco utilizzato nelle specifiche: cerca invece TRF (Time-Resolved Fluorescence). Infatti, dal punto di vista dello strumento, una misura TR-FRET è solo una combinazione di 2 misure TRF: una per il donatore e una per l'accettore. Le misure TR-FRET hanno anche prestazioni migliori se misurate con filtri invece che monocromatici, e deve essere dimostrato ancora una volta che la gamma spettrale dello strumento consente la misura di tutti i fluorofori coinvolti, poiché la misura a 665 nm è comune in alcuni assays TR-FRET.