La tecnica ha un limite di rilevamento di 1 pg di ATP, che equivale a circa 1000 cellule batteriche.
L'uso del rilevamento di ATP bioluminescente per il monitoraggio dell'igiene offre:
- Velocità (minuti, molto più veloce della semina e del conteggio delle colonie)
- Convenienza
- Misura dell'igiene totale
PRINCIPIO DEL TEST ATP PER IL MONITORAGGIO DELL'IGIENE
Per i test di igiene, viene determinato il contenuto totale di ATP del campione. Ciò includerà ATP eucariotica e microbica. È necessario prestare attenzione per evitare la contaminazione del campione o del materiale, poiché l'ATP si trova su molte superfici.
Un buffer privo di ATP viene fornito preumidificato o viene inumidito dall'utente con un buffer privo di ATP, acqua o un estrattore. L'uso dell'estrattore può aiutare con il campionamento in quanto è efficace nel rilasciare ATP dalla superficie. Utilizzando luminometri portatili, il test del buffer viene solitamente eseguito immediatamente. Tuttavia, con alcuni prodotti i buffers sono stabili per un certo numero di ore consentendo all'utente di tornare allo strumento in una "workstation", se si preferisce.
Per determinare il livello di ATP microbico, viene utilizzata l'estrazione selettiva. Innanzitutto, l'ATP non microbico viene estratto con un detergente non ionico (Triton X-100) e quindi distrutto trattando con un alto livello di ATPasi di patata per 5 minuti. Successivamente l'ATP microbico viene estratto utilizzando acido tricloroacetico (5%), un solvente organico (etanolo, acetone o cloroformio) che richiederà una successiva diluizione per evitare l'inibizione della luciferasi, o detergenti cationici. Nell'ultimo passaggio, vengono aggiunte luciferasi e luciferina e la luminescenza viene misurata utilizzando un luminometro. È necessaria un'attenta tempistica di miscelazione e lettura per consentire l'inibizione della luciferasi (Simpson e Hammond, 1991). Poiché il livello di ATP nelle cellule eucariotiche è tre ordini di grandezza superiore a quello delle cellule batteriche, a volte è difficile quantificare separatamente l'ATP eucariotico e microbico con precisione.
Molti produttori offrono tutti i reagenti e i materiali necessari come kit pronti all'uso per rendere il protocollo più semplice e veloce.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
In generale, le superfici pulite mostrano bassi livelli di ATP totale. Quindi, l'emissione di luce maggiore di 2 o 3 volte lo fondo della superficie pulita indica che l'area testata è contaminata da materiale biologico. Tuttavia, il metodo è molto sensibile e in pratica può essere accettata una soglia di 10 volte il fondo. Tuttavia, qualunque sia il prodotto utilizzato, è necessario un lavoro preliminare per stabilire i limiti di Superato / Non superato per il test. Questo di solito viene fatto raccogliendo dati di riferimento secondo le normali procedure di pulizia. Il livello impostato dipende dal tipo e dalle condizioni della superficie e dal metodo di pulizia utilizzato.
STRUMENTI CONSIGLIATI PER IL MONITORAGGIO DELL'IGIENE
I luminometri portatili sono solitamente lo strumento di scelta per il monitoraggio dell'igiene, poiché la misura viene eseguita più comunemente in loco. A volte sono sufficienti luminometri portatili economici basati su fotodiodi per l'analisi qualitativa (contaminati / non contaminati). Tuttavia, gli strumenti basati su PMT come il Junior LB 9509 offrono una maggiore sensibilità e Intervallo dinamico e sono la migliore opzione per misure quantitative.