ELISA – consejos de optimización

Habitualmente, la optimización de los componentes del ensayo ELISA (anticuerpos, tampones, muestras) se realiza probando diferentes soluciones para identificar la concentración de trabajo ideal para cada componente. Para el anticuerpo de captura, se preparan diluciones en tampón de recubrimiento que varían de 5 a 15 pg/ml para anticuerpos no purificados y de 1 a 12 pg/ml para anticuerpos purificados por afinidad. Se recomiendan anticuerpos purificados por afinidad para una relación señal-ruido óptima. La muestra debe añadirse en una concentración alta y baja, reflejando el rango de trabajo esperado. Para el anticuerpo de detección, se puede realizar una configuración de dilución similar en diluyente estándar, que varía de 1 a 10 µg/ml para anticuerpos no purificados y de 0,5 a 5 µg/ml para anticuerpos purificados por afinidad.

Existe una amplia gama de tampones de bloqueo comerciales para elegir, algunos de los cuales contienen BSA. Los fabricantes de estos tampones normalmente proporcionan protocolos de optimización extensos. Si el tampón de bloqueo no está preformulado, pruebe diferentes concentraciones de la proteína (por ejemplo, BSA).

Algunos tipos de muestras, por ejemplo suero o plasma, pueden causar efectos de matriz. Estos pueden reducirse diluyendo la muestra. Los diluyentes estándar deben reflejar la matriz de la muestra lo mejor posible y se debe verificar la linealidad de las diluciones para garantizar un buen rango dinámico.