ELISA – solución de problemas

Señal baja o inexistente

Almacenamiento de reactivo incorrecto

Compruebe si ha seguido las recomendaciones del fabricante del kit.

Anticuerpo almacenado a 4°C durante varias semanas o sometido a ciclos repetidos de congelación/descongelación

Utilice una alícuota nueva de anticuerpo.

Reactivos caducados

No utilice reactivos que hayan pasado la fecha de caducidad.

Diluciones incorrectas preparadas

Compruebe si sus cálculos son correctos. Utilice una mayor concentración de reactivo de detección.

Procedimiento realizado incorrectamente

Repita el ensayo y asegúrese de que los reactivos se han preparado de acuerdo con el protocolo y se añaden en el orden correcto.

Configuración incorrecta del lector de placas

Asegúrese de que la configuración de su lector de microplacas refleje la longitud de onda/filtros recomendados.

No se ha utilizado suficiente anticuerpo

Aumente la concentración de su anticuerpo primario y/o secundario.

Pocillos dañados con pipeta o puntas de lavado.

Tenga cuidado al dispensar y aspirar manualmente. Si es necesario, vuelva a calibrar su lavador de microplacas para que las puntas no toquen el fondo de los pocillos.

Ruido elevado

Temperatura de incubación incorrecta

Siga las recomendaciones de los fabricantes de su kit u optimice la temperatura de incubación.

Tiempos de incubación incorrectos

Siga las recomendaciones de los fabricantes de su kit u optimice el tiempo de incubación.

Lavado insuficiente

Si lava manualmente, invierta la placa sobre papel absorbente y deje drenar completamente para eliminar cualquier fluido residual. También puede ser útil aumentar el número de ciclos de lavado.

Sustrato expuesto a la luz

Realice la incubación del sustrato en la oscuridad.

Reacciones no detenidas

Asegúrese de usar la solución de parada como se recomienda en su protocolo para evitar el desarrollo excesivo de la señal.

Replicados inconsistentes

Lavado insuficiente

Si lava manualmente, invierta la placa sobre papel absorbente y deje drenar completamente para eliminar cualquier fluido residual. También puede ser útil aumentar el número de ciclos de lavado

Anticuerpo de captura no unido a los pocillos

Prepare las etapas de recubrimiento y bloqueo tal y como se recomeinda en el protocolo. Asegúrese de que está utilizando una placa apropìada para ELISA.

Sellado incorrecto de la placa

Utilice el sellador de placas durante la incubación. Para evitar la contaminación de pocillo a pocillo, no lo reutilice.